饲料中粗蛋白检测的常规步骤及方法

一、原理：在催化剂作用下，用浓硫酸破坏试样中的有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，在用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含量，乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白质的含量。

二、操作步骤：

1、试样的称量

2、试样的消煮：向消化管中加6.4g催化剂（1:15硫酸铜：硫酸钾），12mL浓硫酸，于420℃温度曲线升温约2h。取出冷却后加入20 mL蒸馏水。

3、氨的蒸馏：将带消化液的消化管插在蒸馏装置上，以30 mL硼酸为吸收液，加入3滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，向消化管中加入过量氢氧化钠溶液进行蒸馏，一般约蒸馏6~8min，（接收液约200ml，吸收液为中性时，pH试纸）停止蒸馏。

4、滴定：用0.1 mol/L的盐酸标准滴定溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。同时做空白试验。

三、关键控制点：

1、试剂和溶液

试剂需不含氮，对关键试剂需验收。

指示剂临用现加，保证加入量一致，颜色一致。

提醒：硫酸、盐酸属于第三类易制毒化学品，要合法购买、使用和存放。

2、蒸馏过程

严格按照仪器的操作说明进行

仪器的状态：仔细检查好，排查各种异常现象

注意蒸馏管的密封

接收液管要没入到接收液面以下

加碱的量：变黑色，碱不足或铜不足

时间和体积不是判断蒸馏是否完全的唯一条件，注意检查蒸馏液的PH值（广泛试纸，PH值6-7之间）

3、蒸馏步骤的检验

方法：准确称取硫酸铵0.2g（精确到0.0002g）代替试样，无需消化，按照常量蒸馏法或半微量蒸馏法进行定量，结果不乘6.25进行计算。

结果：测得硫酸铵的含氮量为：21.19±0.2%

目的：仪器气密性、加碱、蒸馏、滴定步骤的检验

时机：异常数据、仪器故障、清理管路、定期检查

提示：硫酸铵的含量经检测符合要求，也并不意味着粗蛋白质的检测就一定准确。

4、滴定过程

吸收液应该立即被滴定

标准滴定溶液的放置和保存：盐酸易挥发应密闭，2个月

滴定管的选择：25ml，50ml

规范滴定操作：速度、手法、读数

终点判断以白色为背景

5、空白测定

方法：可以只称取催化剂，加入浓硫酸，经消煮、蒸馏、滴定做空白试验。

目的：消除试剂空白

要求：消耗0.1 mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL

消耗0.02mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.3mL